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[1]胡业辉,李益鹏,王紫英,等.绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定[J].复旦学报(自然科学版),2019,02:183-190.
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绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定(PDF)

《复旦学报》(自然科学版)[ISSN:/CN:]

期数:
2019年02
页码:
183-190
栏目:
出版日期:
2019-04-17

文章信息/Info

Title:
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作者:
胡业辉李益鹏王紫英陈勖任真丁澦
复旦大学生命科学学院
Author(s):
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关键词:
荧光蛋白 绿色荧光蛋白结合蛋白 纳米抗体 蛋白表达 蛋白纯化 微量热泳动
Keywords:
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分类号:
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DOI:
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文献标识码:
A
摘要:
绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原核表达系统,然后通过NiNTA亲和层析和Mono Q阴离子交换层析纯化,每升菌液能够得到超过43mg、纯度超过95%的重组GBP1蛋白.我们通过MALDI-TOF/TOF质谱法测定纯化的GBP1的精确分子量,通过微量热泳动(MST)和等温滴定量热(ITC)实验检测GBP1与7种不同来源荧光蛋白的亲和力.结果显示GBP1特异性地与源自Aequorea victoria的荧光蛋白及其衍生荧光蛋白相互作用,与RFP和Zoanthus GFP等无相互作用.GBP1与EGFP和sfGFP的亲和力最高,与YPet和TSapphire的亲和力稍弱,与CyPet的亲和力最低.
Abstract:

参考文献/References

备注/Memo

备注/Memo:
更新日期/Last Update: 2019-04-19